🧬 DNA片段的扩增及电泳鉴定
缓冲液
dNTP
引物 I
引物 II
模板DNA
无菌水
Taq酶
⚡ 瞬时离心
🚀 易错点
▼
⚠️ 易错点:
① 缓冲液:提供Mg²⁺,是Taq酶的激活剂,维持反应体系pH稳定。
② dNTP:提供DNA合成所需的四种脱氧核苷酸原料。
③ 引物I/II:分别结合在DNA两条链的两端,引导DNA聚合酶延伸方向。
④ 模板DNA:含有待扩增的目的基因片段。
📝 操作提示
▼
请先拿起移液器,到上方试剂瓶中吸取试剂
✅ 步骤状态
完成当前步骤后可进入下一关
✔ 正确!
下一步
重置本步骤
重置实验
🧪 放入离心管
变性:
--
94℃
55℃
72℃
复性:
--
94℃
55℃
72℃
延伸:
--
94℃
55℃
72℃
时间: 30s / 30s / 1min
循环×30次
▶ 开始运行
🚀 易错点
▼
⚠️ 易错点:94℃是变性温度,使DNA双链解开;55℃是复性温度,使引物与模板结合;72℃是延伸温度,Taq酶在此温度下催化DNA链延伸。
📌 预变性:94℃,5 min,使模板DNA完全变性。
📌 循环30次:94℃ 30s → 55℃ 30s → 72℃ 1min。
📌 最后一次:94℃ 1min → 55℃ 30s → 72℃ 10min,使产物延伸完全。
📝 操作提示
▼
请点击【放入离心管】将离心管放入PCR仪
✅ 步骤状态
完成当前步骤后可进入下一关
✔ 正确!
下一步
重置本步骤
重置实验
琼脂糖
电泳缓冲液
核酸染料
梳子
🔥 加热中...
⏳ 凝固中...
拔梳子并取出琼脂糖凝胶
🚀 易错点
▼
⚠️ 易错点:琼脂糖浓度一般为0.8%~1.2%,浓度过高会导致DNA条带分辨不清。
📝 操作提示
▼
请拖拽琼脂糖粉末到烧杯中。
✅ 步骤状态
完成当前步骤后可进入下一关
✔ 正确!
下一步
重置本步骤
重置实验
载样缓冲液
Marker
混合管
🧪 放入电泳槽
请判断:凝胶的加样孔应该朝向电泳槽的哪一侧?
A. 正极(红色电极)
B. 负极(黑色电极)
▶ 开始混合
PCR产物管
✏️ 开始加样
🚀 易错点
▼
⚠️ 易错点:凝胶需完全浸没在电泳缓冲液中,加样孔朝向负极(黑色电极),DNA才会由负极向正极移动。
📝 操作提示
▼
请点击【放入电泳槽】按钮。
✅ 步骤状态
完成当前步骤后可进入下一关
✔ 正确!
下一步
重置本步骤
重置实验
电泳后的凝胶
紫外凝胶成像仪
电泳中...
⚡ 连接电源开始电泳
请根据电泳结果图中的Marker(标准参照物),判断PCR产物DNA片段的大小。
A. 200 bp
B. 500 bp
C. 600 bp
D. 1000 bp
🎉 恭喜你!已成功完成整个DNA片段的扩增及电泳鉴定实验!
🚀 易错点
▼
⚠️ 易错点:DNA带负电荷,在电场中由负极向正极移动。加样孔应朝向负极(黑色电极),正极(红色电极)在另一端。电压一般设为1~5 V/cm。
📝 操作提示
▼
请点击【连接电源开始电泳】按钮。
✅ 步骤状态
进行中
✔ 正确!
下一步
重置本步骤
重置实验
PCR体系配制
关卡1
PCR扩增
关卡2
凝胶制备
关卡3
点样
关卡4
电泳观察
关卡5